G. Martínez et col.
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2.2. Valoración clínica del desarrollo de malaria cerebral en el modelo murino
El progreso de la infección fue analizado diariamente en todos los ensayos
in vivo
mediante la determinación de los niveles de parasitemia en sangre
periférica utilizando frotis sanguíneos, teñidos con la solución de Wright’s (Merck)
seguido del
contaje
al microscopio de los eritrocitos infectados. Las alteraciones
neurológicas asociadas a MC fueron establecidas también diariamente mediante
parámetros definidos por el protocolo SHIRPA de evaluación del comportamiento
(32). Así, mediante la observación detallada de los animales, se valoró la presencia
de erizamiento del pelo, temblor, baja respuesta a estímulos, parálisis,
lateralización, desviación de la cabeza, vueltas sobre sí mismo, ataxia, elevación de
las patas traseras y convulsiones. La capacidad de movimiento de los ratones fue
analizada aplicándoles un test de frecuencia motora descrito previamente (32, 33).
Además de los síntomas neurológicos, se determinó, en días alternos, la
concentración de hemoglobina en sangre durante el progreso de la infección,
usando el reactivo de Drabkin (34) (SIGMA-‐Aldrich).
2.3. Ensayo de permeabilidad de la barrera hematoencefálica (BHE)
El análisis de la integridad de la BHE se realizó inyectando
intraperitonealmente a los ratones 200µL de solución de Evans Blue (35) al 2% en
solución salina. Una hora más tarde se sacrifican los animales mediante dislocación
cervical y se les extrae el cerebro para observar, de acuerdo al grado de tinción
azul del tejido cerebral, el posible daño en la permeabilidad de la barrera.
2.4. Tratamiento antimalárico con Artesunato en el mo elo murino de malaria
cerebral
La terapia con Artesunato en el modelo experimental de MC utilizado se
llevó a cabo administrando 5 únicas dosis del fármaco bajo una pauta de orden
diaria (OD). El tratamiento se inició en los ratones infectados cuando manifestaban
signos y síntomas claros de una malaria cerebral estándar (EMC) y en los ratones
que no desarrollaban MC, cuando estos presentaran síntomas graves de
decaimiento general, con ciertas similitudes al momento elegido en los animales
con EMC, pero en ausencia de síntomas de deterioro neurológico. A todos los
animales seleccionados se les administró una dosis de 32mg artesunato/kg de
peso disuelto en bicarbonato de sodio al 5% (grupo Artesunato). Los grupos
control del tratamiento para cada fenotipo de la enfermedad recibieron solución
de bicarbonato de sodio al 5% siguiendo la misma pauta de administración
(vehículo) (Figura 1).
