Regulación de la neurotransmisión glicinérgica…
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bloqueo farmacológico específico parece reducir la sensación de dolor en ratas (36,
37).
De este modo, consideramos de interés profundizar en los mecanismos
moleculares de la posible implicación de GlyT2 en la acción de PGE2 sobre la
inhibición glicinérgica. En este trabajo hemos observado que PGE2 produce una
activación de la recaptación presináptica llevada a cabo por GlyT2 y, gracias al uso
de agonistas específicos de los receptores EP de la prostaglandina, hemos podido
determinar la implicación del subtipo de receptor EP3 en el efecto observado. En
consonancia con esto, hemos detectado que la expresión del receptor EP3 en
sinaptosomas de médula espinal de rata está muy por encima de la expresión de
los subtipos EP2 y EP4, y ligeramente por encima de la expresión de EP1, lo que es
coherente con los resultados obtenidos.
En concreto, la activación de los receptores EP3 conlleva usualmente
disminuciones notables de AMP cíclico (AMPc) y aumentos en la concentración de
calcio (Ca+2) intracelular (24). Se ha descrito que aumentos de Ca+2 intracelular
pueden producir una desubiquitinación de un amplio número de proteínas en la
sinapsis (38) por lo que quisimos comprobar si GlyT2 podría sufrir
desubiquitinación tras un aumento de Ca+2 intracelular llevado a cabo por la
activación del receptor EP3. Esto se realizó inmunoprecipitando proteínas
ubiquitinadas desde sinaptosomas de médula de rata, y comprobando si PGE2
producía cambios en la cantidad de GlyT2 ubiquitinado. Los resultados mostraron
una disminución significativa en la ubiquitinación de GlyT2 tras el tratamiento con
PGE2, mientras que la cantidad total de proteína no se vió afectada. La
ubiquitinación de GlyT2 ha sido recientemente descrita como una modificación
necesaria para la endocitosis del transportador, de tal modo que la incapacidad de
ubiquitinar a GlyT2 en la lisina 791 de su carboxilo terminal impide su endocitosis
regulada por PKC (8). La imposibilidad de endocitosis por la falta de ubiquitinación
produce, por tanto, un acúmulo del transportador en la superficie celular (como
ocurre con otras proteínas; 39), lo que conlleva un aumento del número de
moléculas activas en membrana plasmática, aumentando por tanto la actividad
global de GlyT2. Este aumento de actividad produce una aceleración de la
recaptación del neurotransmisor, disminuyendo el tiempo de acción de este en el
espacio sináptico y reduciendo la acción sináptica de la glicina.
En conjunto,
estos datos muestran que PGE2 disminuye la
neurotransmisión glicinérgica mediante dos efectos coordinados en la postsinapsis
y en la presinapsis: 1) en la postsinapsis promueve una disminución de la actividad
del receptor GlyRα3 por fosforilación directa dependiente de la transducción por
receptores EP2 (18); y 2) en la presinapsis produce un aumento de la recaptación
de glicina desde el espacio sináptico mediada por el transportador GlyT2,
presumiblemente a través de los receptores EP3 y que probablemente es debida a
